Identifiant pérenne de la notice : 247691461
Notice de type
Notice de regroupement
Note publique d'information : Les voies directe et indirecte d'asparaginylation de l'ARNt impliquent 2 enzymes particulières,
une aspartyl-ARNt synthétase (AspRS) capable de charger l'ARNtAsn et l'ARNtAsp aussi
efficacement et une amidotransférase ARNt dépendante (AdT) qui convertie l'Asp-ARNtAsn
en Asn-ARNtAsn. Cette voie, fréquemment utilisée chez les microorganismes, est aussi
bien employée pour la formation de l'Asn-ARNtAsn que pour la synthèse ARNt dépendante
de l'Asn. Nous avons établi l'interrelation structure-fonction particulière des AspRS.
Les AspRS archaebactériennes possèdent une spécificité relâchée alors que les AspRS
eubactériennes ont une spécificité stricte. Nous avons cristallisé l'AspRS de spécificité
relâchée de Thermus thermophilus et la comparaison de sa structure avec celle d'une
AspRS de spécificité stricte montre que la spécificité est due a une boucle qui contacte
l'anticodon de l'ARNt. Cette observation a été confirmée par mutagenèse en convertissant
la spécificité stricte d'une AspRS en spécificité relâchée.Des études préliminaires
avaient suggéré que l'Asn-ARNtAsn n'est pas reconnu par le facteur d'élongation EF-Tu,
qui est normalement responsable de l'acheminement des aa-ARNt sur le ribosome. Les
bases moléculaires de la discrimination de l'Asp-ARNtAsn des aa-ARNt homologues ont
été révélées par l'utilisation de variant de l'ARNt et de la protéine.Nous avons cloné
et surproduit l'AdT de T. thermophilus et nous avons montré sa capacité d'amidation
de l'Asp-ARNtAsn aussi bien que le Glu-ARNtGln. Nous avons également démontré que
certaines archaebactéries possèdent une AspRS de spécificité stricte et le système
complet de l'asparaginylation directe de l'ARNtAsn. En effet, ces organismes possèdent
une Asn synthétase qui présente environ 40% d'identité de séquence avec les AspRS
et les AsnRS.
Note publique d'information : Indirect pathway of tRNA asparaginylation involves two particular enzymes, an aspartyl-tRNA
synthetase (AspRS) that is able to aspartylate tRNAAsp as well as tRNAAsn and a tRNA-dependant
amidotransferase (Adt) that converts Asp-tRNAAsn into Asn-tRNAAsn. This pathway, frequent
in microorganisms, is used either to form Asn-tRNAAsn or to synthesize Asn. Our first
investigations established the interrelation between structural and functional peculiarities
of AspRS. AspRS from the archaebacterial structural group exhibits a dual specificity
for tRNA whereas AspRS from the eubacterial group is monospecific. We have crystallized
the dual-specific AspRS from Thermus thermophilus and comparison of its structure
to that of a monospecific AspRS shows that specificity AspRS is due to a single loop
that contacts the anticodon of tRNA. This observation has been confirmed by mutagenesis
to convert a monospecific AspRS into a dual one. Preliminary studies had shown that
Asn-tRNAAsn is not recognized by the elongation factor Tu, which is normally responsible
for delivering aa-tRNA to the ribosome. The molecular basis of discrimination of Asp-tRNAAsn
versus the correct aa-tRNA has been revealed by use of protein and tRNA variants.
We have cloned and overproduced the Adt from T. thermophilus. We have shown its ability
to amidate Asp-tRNAAsn as well as Glu-tRNAGln. We have also demonstrated that archaebacteria
possessing a specific AspRS also possess the complete system for direct asparaginylation
of tRNAAsn. Indeed, they also possess an asparagine synthetase that shares high identity
with AspRS and AsnRS.
paprika.idref.fr
data.idref.fr
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